白癜风检查需要做什么 http://pf.39.net/bdfyy/bdfhl/190329/7007722.html作者：1张杰，2刘笑，1俞伟男，3缪明永，4石汉平
（1徐州医院，医院内分泌科，江苏淮安；2第二医院急诊科，上海；3第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室，上海；4首都医科大医院普外四科/临床营养科，北京）
近年来，全球恶性肿瘤的发生率不断增加，已成为威胁人类健康的主要因素之一，而接受放疗、化疗以及外科手术后，加之患者本身生理及心理因素的改变[1,2]，肿瘤患者进食减少，代谢改变，使营养不良成为肿瘤患者的常见并发症[3]，也是恶性肿瘤患者死亡的主要原因之一[4,5]。营养不良是一种综合征，包括能量及营养素代谢的多个环节障碍[6]，导致恶液质的发生，机体逐渐出现显著消瘦、贫血、精神衰弱等全身机能衰竭的现象[7,8]，严重影响患者的生存质量，增加患者及其家庭的经济负担[9]，因而，合理的营养治疗已成为提高肿瘤综合治疗疗效的重要环节。乳清蛋白是乳类的主要成分，其氨基酸模式符合人体需要。
活性乳清蛋白（activewheyprotein）--ABD活性因子，采用低温萃取技术从牛乳中获得保留了生物活性的乳清蛋白，它是一种能有效改善患者营养状态的优质蛋白质。有研究显示，ABD活性因子还能作为谷胱甘肽（glutathi-one，GSH）前体物，提升细胞GSH含量，其抗肿瘤作用也在几项临床试验中得到证实[10,11]，但在胰腺癌相关方面的研究尚少见，本研究利用人胰腺癌细胞的荷瘤动物模型初步探讨活性乳清蛋白防治恶液质的效果及可能机制。材料与方法：1试剂PBS
缓冲液、DMEM高糖培养基、青-链双抗（美国Hyclone公司），胰蛋白酶、胎牛血清（美国Gibco公司），ABD活性因子（含90%乳清蛋白，美睿健康产业（重庆）有限公司），黄豆蛋白粉（80%黄豆蛋白，美国），谷胱甘肽检测试剂盒（碧云天）。
2细胞株
人胰腺癌panc-1细胞购买于中国科学院细胞库。
3动物
4周龄雄性BALB/C（nu/nu）品系裸小鼠30只，购于上海灵畅生物科技有限公司[动物许可证编号：SCXK（沪）-]，饲养于第二军医大学公共卫生学院实验动物中心SPF级环境中。
4细胞培养
panc-1细胞用DMEM培养基（含10%胎牛血清和U/ml的青链霉素）在5%CO2、37℃培养箱中培养，隔天换培养液，胰蛋白酶消化传代。
5胰腺癌移植瘤模型的建立及营养干预方案
30只裸鼠适应性生长1周后，取对数生长期的胰腺癌细胞panc-1，用PBS调整细胞浓度为1×/μl左右，于小鼠的右后支背部皮下接种细胞悬液μl，12天长出移植瘤，用游标卡尺测量肿瘤直径，按照Ｖ＝ab2π/6（a为最大直径，ｂ为最小直径）计算肿瘤，用游标卡尺测量肿瘤直径，按照Ｖ＝ab2π/6（a为最大直径，ｂ为最小直径）计算肿瘤体积，当瘤体积达到80mm3时进行实验。按移植瘤瘤体大小随机分组，每组8只：正常饮食（stan-darddiet，SD）组，黄豆蛋白（Soy）组，ABD活性因子（ABD）组，植物蛋白粉和乳清蛋白粉分别加入灭菌饮用水中，浓度为mg/ml，早晚各换水一次，经过前期观察记录及查阅文献，裸鼠每日饮水量5ml左右，因而蛋白摄入量在mg左右。
6检测指标
整个实验过程每天观察裸鼠活动状态，每周测量裸鼠体质量、瘤体大小，实验终点心脏取血、取瘤，测量血液及瘤组织中GSH含量。根据说明书具体方法如下：组织样品液氮速冻，研磨成粉末，对于新鲜血液样本，g离心10分钟后，加入蛋白去除试剂S溶液充分匀浆，4℃放置10分钟后，10,g4oC离心10分钟，取上清用于总谷胱甘肽的测定。将准备好的上清依次加入96孔板，然后每孔加入μl总GSH检测工作液混匀，室温孵育5分钟，加入50μl0.5mg/mlNADPH溶液，混匀。立即用酶标仪测定A，对照标准曲线计算总GSH含量，血液样品以μmol/L血浆为单位表示，组织样品以μg/g组织为单位表示。
7统计方法
应用SPSS16.0统计软件进行统计学处理。统计数据用均数±标准差（x±s）表示，采用单因素方差分析比较组间差异，组间两两比较采用q检验，P＜0.05为差异有统计学意义。
结果：1裸鼠一般状态及体重变化
实验干预第6周开始SD组小鼠活动度逐渐降低，皮肤干燥，蜕皮现象严重，Soy组亦少动，而ABD组小鼠皮肤光滑红润，活动度没有明显下降。第6周开始三组荷瘤鼠体重均出现明显下降，但ABD组体重下降要缓于SD组和Soy组，至第8周ABD组裸鼠体重（24.35±1.89）g显著高于SD组（20.04±2.41）g和Soy组（19.24±2.40）g（P＜0.05），见图1A、图1B。
由于ABD，Soy蛋白从饮水中加入，建议报道三组小鼠的每日饮水量，从而计算出相对于标准饲料组，这两组额外增加的每日蛋白质摄入。由于蛋白的摄入是主要干预因素，读者需要知道每日增加的蛋白质摄入量。
2移植瘤体积及瘤体质量
移植瘤接种成功后各组肿瘤体积呈逐步上升趋势，三组间差别无统计学意义（P＞0.05），见图2A。至实验终点，SD组瘤组织质量为（2.43±0.14）g，Roy组（2.21±0.29）g，ABD组（2.30±0.23）g，三组差别无统计学意义，见图2B。
图1裸鼠一般状态及体重变化
3生存曲线
至实验终点，SD组于第7周死亡2只，第9周死亡4只、存活2只，生存率为25%，平均生存时间为（56.00±5.29）天；Roy组分别于第6、8周死亡2只，第9周死亡1只、存活3只，生存率37.5%，平均生存时间为（51.63±10.54）天；ABD组于第9周死亡1只，存活7只，生存率为87.5%，平均生存时间为（62.13±2.47）天，见图3。生存分析结果显示，ABD组平均生存时间明显高于Roy组和SD组（P＜0.05），Roy组平均生存时间低于SD组但差别无统计学意义（P＞0.05）。
4谷胱甘肽含量
GSH广泛存在于动植物中，具有抗氧化和增强机体免疫力等作用。本研究检测了血液及瘤组织中GSH含量，单因素方差分析结果显示，三组裸鼠血液中GSH含量差别有统计学意义（P＜0.01），ABD组GSH含量明显高于Roy组和SD组（P＜0.01），见图4A。三组瘤组织中GSH含量分别是：SD组（.18±57.98）μg/g、Soy组（.11±72.41）μg/g和ABD组（.10±32.56）μg/g，结果表明ABD组肿瘤组织中GSH低于Roy组和SD组，但差别无统计学意义P＞0.05，见图4B。
图２肿瘤体积及瘤体质量
图3不同干预方式下裸鼠生存曲线
讨论：
由于肿瘤本身及抗肿瘤治疗的影响，肿瘤患者营养不良的发生率高达40%~80%[12]，然而这些患者营养治疗率却很低，因此造成住院时间延长，住院费用增加以及生活质量降低，并且严重影响临床预后[9,13]。因而，了解肿瘤患者的营养状况，予以积极妥善的营养干预是改善肿瘤临床结局的重要措施。乳清蛋白含多种活性成分，必需氨基酸组成与人体需要量模式相近，富含支链氨基酸，尤其是亮氨酸，而亮氨酸对于促进骨骼肌合成、增加肌肉体积、降低TNF-α水平、增加胰岛素敏感性[14,15]、改善恶液质状况具有重要作用[16,17]。
图4GSH水平比较
乳清蛋白还富含人体所需的钙、铁、镁等多种微量元素，能够显著改善人体的营养状态。许多研究表明，乳清蛋白及其衍生物（浓缩、分离、水解产物等）除了改善营养状态，还具有多种抗癌、抗氧化、抗炎等多种生理效应[18]，见图5。本研究应用的活性乳清蛋白，源自天然新鲜牛乳，采用低温专利萃取技术，保存了具有高生物活性的乳清蛋白，其蛋白含量高达90%以上，普通乳清蛋白其蛋白含量一般在80%左右。通常认为，蛋白质主要在肠道分解为游离氨基酸后被小肠黏膜吸收，但早在20世纪70年代，GardnerML[19]等就证实，短肽经肠道吸收的效率超过游离氨基酸，之后大量研究表明，蛋白质消化吸收是双通道模式，即短肽和游离氨基酸，且其中60%左右是以短肽吸收的。研究显示，活性乳清蛋白（ABD）含有许多活性肽[20,21]，可以直接吸收进入机体发挥作用。这表明活性乳清蛋白吸收利用效率可能高于普通乳清蛋白。
图5乳清蛋白主要成分及其应用
本研究通过建立裸鼠胰腺癌模型，初步探讨活性乳清蛋白对荷瘤小鼠营养治疗效果，结果显示，活性乳清蛋白虽然未抑制瘤组织的生长，但能明显改善裸鼠生活状态，延长荷瘤鼠的生存期，这可能与活性乳清蛋白延缓荷瘤鼠体重下降、减轻恶液质的发生有关。
同时，我们发现，ABD组除了改善一般营养状况之外能显著提高裸鼠血液中GSH含量，这表明活性乳清蛋白通过改善营养状况和增强抗氧化能力来提高机体抵抗力。氧化应激是肿瘤发生的一个常见因素，几乎所有肿瘤中均存在细胞内氧化-抗氧化体系的失衡[19,22]，GSH不仅能消除人体自由基发挥抗氧化作用[23]，同时还能增加T细胞活力，并完善免疫系统，提高人体免疫力[24]，这可能是延长ABD组裸鼠生存期的重要因素。有研究发现，乳清蛋白中的α-乳白蛋白、β-乳球蛋白等成分具调节特异性免疫应答的功能，可直接激活中性粒细胞的产生，聚集IL-6、IL-8等趋化因子和某些细胞因子，从而增强抗炎效果和提高患者免疫力[25]，BadrG等[26]在动物实验中同样发现，乳清蛋白治疗组血浆IL-1α、IL-1β、IL-10、TNF-α、氧自由基以及胆固醇水平显著低于对照组，而IL-2，IL-4，IL-7，IL-8和GSH水平却显著增加，此外，可应对不同抗原刺激的淋巴细胞、单核细胞、巨噬细胞等增殖能力明显增强，炎症是肿瘤发生、发展公认的诱发因素之一，目前慢性炎症被认为是人类肿瘤的重要特征[27,28]，活性乳清蛋白因子通过增强机体抗炎能力，一定程度上发挥抗肿瘤作用。
许多研究发现，肿瘤细胞中GSH含量较高，这与其应对自身氧化应激、获得快速增殖有关[29,30]。同时，本研究检测瘤组织中GSH含量发现ABD组瘤组织中GSH含量反而降低，但与其它两组差别没有统计意义。早前BaruchelS等[31]研究表明，由于丧失正常新陈代谢的功能，所以癌细胞不能进行正常的GSH代谢，当暴露在大量GSH前体物质--ABD活性因子时，由于“负反馈机制”会减少肿瘤细胞内GSH的合成，而正常细胞可以不断生成GSH，这种选择性调节GSH合成的作用可以在保护正常细胞的同时抑制癌细胞增殖。
营养不良、体重减轻以及机体免疫功能下降是肿瘤及其治疗过程中常见的不良反应[32,33]，积极妥善的营养治疗一方面能够改善生活质量，延长生存期[34,35]，另一方面可增强放化疗的耐受性及敏感性[36]。此外，适当的营养干预有可能通过调节肿瘤细胞的异常代谢达到抑制肿瘤生长的目的[37]。ABD活性因子能够改善营养状况，不断生成和补充活性GSH，发挥抗氧化、增强免疫功能等作用，改善生活质量，延长生存时间，可作为临床肿瘤患者治疗过程中良好的营养补充剂，然而，其具体的机制仍需进一步实验阐明。
ABD活性因子目前已在20多个国家取得了69项医药类专利，更有大量研究支持，多于46篇文献发表于国际知名医学期刊，众多国际权威专家临床论证，被美国PDR（内科医师手册，俗称医典）、加拿大CPS（药物特性手册，俗称药典）收录。ABD活性因子的抗肿瘤作用已在几项临床试验中得到证实，但在胰腺癌相关方面的研究尚少见，而此次临床研究成果的发布填补了该项空白，具有潜在的重要的临床指导意义。
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